RESUMO
INTRODUCTION: Pseudo-infectious yellow fever viral particles (YFV-PIVs) have been used to study vaccines and viral packaging. Here, we report the development of a packaging cell line, which expresses the YFV prM/E proteins. METHODS: HEK293 cells were transfected with YFV prM/E and C (84 nt) genes to generate HEK293-YFV-PrM/E-opt. The cells were evaluated for their ability to express the heterologous proteins and to package the replicon repYFV-17D-LucIRES, generating YFV-PIVs. RESULTS: The expression of prM/E proteins was confirmed, and the cell line trans-packaged the replicon for recovery of a reporter for the YFV-PIVs. CONCLUSIONS: HEK293-YFV-prM/E-opt trans-packaging capacity demonstrates its possible biotechnology application.
Assuntos
Vacinas de Partículas Semelhantes a Vírus/imunologia , Montagem de Vírus/imunologia , Replicação Viral/imunologia , Vírus da Febre Amarela/imunologia , Citometria de Fluxo , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Proteínas de Fluorescência Verde , Células HEK293 , Humanos , Vacinas de Partículas Semelhantes a Vírus/genética , Montagem de Vírus/genética , Replicação Viral/genética , Vírus da Febre Amarela/genéticaRESUMO
Abstract INTRODUCTION: Pseudo-infectious yellow fever viral particles (YFV-PIVs) have been used to study vaccines and viral packaging. Here, we report the development of a packaging cell line, which expresses the YFV prM/E proteins. METHODS: HEK293 cells were transfected with YFV prM/E and C (84 nt) genes to generate HEK293-YFV-PrM/E-opt. The cells were evaluated for their ability to express the heterologous proteins and to package the replicon repYFV-17D-LucIRES, generating YFV-PIVs. RESULTS: The expression of prM/E proteins was confirmed, and the cell line trans-packaged the replicon for recovery of a reporter for the YFV-PIVs. CONCLUSIONS: HEK293-YFV-prM/E-opt trans-packaging capacity demonstrates its possible biotechnology application.
Assuntos
Humanos , Replicação Viral/imunologia , Vírus da Febre Amarela/imunologia , Montagem de Vírus/imunologia , Vacinas de Partículas Semelhantes a Vírus/imunologia , Replicação Viral/genética , Vírus da Febre Amarela/genética , Montagem de Vírus/genética , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Proteínas de Fluorescência Verde , Células HEK293 , Vacinas de Partículas Semelhantes a Vírus/genética , Citometria de FluxoRESUMO
Full-length dengue virus (DENV) cDNA clones are an invaluable tool for many studies, including those on the development of attenuated or chimeric vaccines and on host-virus interactions. Furthermore, the importance of low passage DENV infectious clones should be highlighted, as these may harbour critical and unique strain-specific viral components from field-circulating isolates. The successful construction of a functional Brazilian low passage DENV serotype 2 full-length clone through homologous recombination reported here supports the use of a strategy that has been shown to be highly useful by our group for the development of flavivirus infectious clones and replicons.
.Assuntos
DNA Complementar/genética , Vírus da Dengue/genética , RNA Viral/genética , Brasil , Clonagem Molecular , Dados de Sequência Molecular , Análise de Sequência de DNA , Replicação ViralRESUMO
Full-length dengue virus (DENV) cDNA clones are an invaluable tool for many studies, including those on the development of attenuated or chimeric vaccines and on host-virus interactions. Furthermore, the importance of low passage DENV infectious clones should be highlighted, as these may harbour critical and unique strain-specific viral components from field-circulating isolates. The successful construction of a functional Brazilian low passage DENV serotype 2 full-length clone through homologous recombination reported here supports the use of a strategy that has been shown to be highly useful by our group for the development of flavivirus infectious clones and replicons.
Assuntos
DNA Complementar/genética , Vírus da Dengue/genética , RNA Viral/genética , Brasil , Clonagem Molecular , Dados de Sequência Molecular , Análise de Sequência de DNA , Replicação ViralRESUMO
As infecções pelo vírus dengue têm se tornado um problema crescente de Saúde Pública em regiões tropicais e subtropicais do mundo. O vírus pertence à família Flaviviridae com quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1 a DENV-4). Uma possível estratégia para evitar a patogenia associada com uma vacina para o dengue (que deve ser tetravalente), seria a construção de uma vacina quimérica composta de epítopos críticos selecionados dos quatro sorotipos. A maioria dos epítopos envolvidos na neutralização do vírus está presente na glicoproteína E do envelope, que é a maior proteína de superfície da partícula viral. O objetivo deste trabalho foi identificar epítopos de célula B na glicoproteína E do vírus dengue sorotipo 3. Para o mapeamento de epítopos imunodominantes, noventa e cinco peptídeos (15-mers cada, sobreposição de 10) foram sintetizados (Synpep, California-USA), a partir da sequência de 490 aminoácidos da glicoproteína E do envelope do DENV-3, de cepa circulante no Brasil. Estes peptídeos foram testados por ELISA contra um pool de soros de pacientes positivos e negativos para dengue, coletados durante a fase de convalescença da infecção por DENV-3. Os resultados mostraram que os soros de humanos reagiram com onze, dos noventa e cinco peptídeos testados, distribuídos em 5 regiões com aminoácidos na posições 51-65 (peptídeo 11), 71-90 (peptídeos 15 e 16), 131-170 (peptídeos 27, 28, 29, 30, 31 e 32), 196-210 (peptídeo 40) e 246-260 (peptídeo 50). A análise da curva ROC mostrou que, dentre os peptídeos identificados, nove seriam capazes de diferenciar entre pacientes com DENV-3 de pacientes não-dengue e três capazes de diferenciar a infecção por DENV-3 daquelas por outros sorotipos virais (DENV-1 e DENV-2). Os epítopos imunodominantes aqui descritos, junto com outros epítopos bem documentados, são potencialmente relevantes para o desenho de uma vacina para o vírus dengue e para o desenvolvimento de kits de diagnóstico específicos.
Assuntos
Humanos , Dengue , Vírus da Dengue , Epitopos de Linfócito B , Peptídeos/síntese química , Sequência de Aminoácidos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Mapeamento de Epitopos , Epitopos Imunodominantes/análise , Produtos do Gene envRESUMO
Objetivo: determinar a prevalência do anti-HCV em pacientes portadores do HIV. Método: a pesquisa do anti-HCV foi realizada pelo método ELISA de 3ª geração (Hepatitis C anti-HCV da Wiener lab.). Resultados: a co-infecção encontrada foi de 4,1% (14/343). Dos co-infectados, 64,2%(9/14) eram do sexo masculino e a faixa etária variou de 30 a 39 anos, 64,2%(9/14). Conclusão: a prevalência da co-infecção HCV/HIV, neste estudo, foi baixa se comparada com outras regiões do Brasil e do mundo.
Objective: To determine the prevalence of anti-HCV among HIV seropositive patients. Methods: HCV antibodies were detected by ELlSA (Hepatitis C anti-HCV, Wiener Lab.). Results: The co-infection found was 4,1%(14/343). Among co-infected, 64,2%(9/14) were male sex and age varied from 30 a 39 years with 64,2% (9/14). Conclusion: The prevalence of HCV/H1V co-infection in that study was low in compared with others regions of Brazil and the world.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Adulto , HIV , Anticorpos Anti-Hepatite C , Hepacivirus , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Estudos SoroepidemiológicosRESUMO
Introdução: o vitiligo é uma doença cuja etiologia não se encontra bem estabelecida, embora fatores de ordem genética, neural, autocitotóxica e autoimune tenham sido propostos. Pesquisas recentes sugerem que o vitiligo é provavelmente uma doença heterogênea com múltiplas causas. Evidências indiretas de que infecções virais podem contribuir para a patogogênese do vitiligo incluem: síndromes semelhantes à influenza precedendo o início do vitiligo; a doença ocorrendo em pacientes com a síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA) e o DNA do citomegalovírus (CMV) identificado pela reação em cadeia da polimerase (PCR) em pacientes portadores de vitiligo. Objetivo: Determinar a prevalência de anticorpos para o CMV, entre os pacientes portadores do vitiligo, comparando com uma população controle.Método: Anticorpos para o CMV foram pesquisados pelo método imunoenzimático (ELISA) em 70 portadores de vitiligo e em 256 pacientes-controle, provenientes do Setor de Dermatologia do Hospital das Clínicas da UFPE, no período de novembro de 1999 a junho de 2000.Resultados: Os resultados mostraram que 70 por cento dos pacientes com vitiligo foram positivos para o CMV, enquanto que nos pacientes controle, a presença de IgG anti-CMV foi de 77,7 por cento. Não houve diferença estatisticamente significante mesmo após ajustes para os possíveis fatores de confusão.Conclusão: Os autores concluem que a sorologia parece não ser bom marcador para estabelecer a possível relação entre CMV e o vitiligo. Novo estudos deverão ser realizados utilizando técnicas de biologia molecular (PCR) procurando identificar o DNA viral em lesões vitiliginosas
